参数
18×16 mm 玻璃板一块就算一块胶;按下面的默认体积,一块胶需要分离胶 8 ml、浓缩胶 5 ml。
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常用 8%(大分子)、10%(通用)、12%、15%(小分子);浓度越高孔径越小。
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实验室常用 30%(29:1 或 37.5:1)或 40% 丙烯酰胺/Bis 母液,选不到就填自己那瓶的浓度。
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浓缩胶几乎固定用 4%(有时 5% 或 6%),靠 pH 6.8 与 pH 8.8 之间的移动界面把样品压成一条带。
ml
按制胶架和玻璃板规格调整:0.75 mm 的 Mini 胶一般一块 8~10 ml 分离胶。
ml
配方
制备流程
常见浓度怎么选
| 分离胶 | 适合分离 | 典型用途 |
|---|---|---|
| 8% | 大于 100 kDa | 大分子蛋白 |
| 10% | 40 ~ 200 kDa | 通用,多数抗体靶点 |
| 12% | 15 ~ 100 kDa | 日常最常用的浓度 |
| 15% | 10 ~ 70 kDa | 中小分子蛋白 |
| 15% 铺底 + 8% 上层 | 10 ~ 200 kDa | 双层胶,一次跑完宽范围 |
| 20% | 3 ~ 50 kDa | 多肽与很小的蛋白 |
| Tris-Tricine 胶 | 小于 10 kDa | 多肽、蛋白片段(需另配 Tricine 缓冲系统) |
| 4% 浓缩胶 | — | 几乎所有常规配方都用它 |
上表只是经验对照,不是本工具算出来的结果:分离胶百分比决定适合分离的蛋白区间,浓度越高孔径越小。