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SDS-PAGE-Calc 凝胶配方计算

分离胶 + 浓缩胶 · 按块数与百分比 · 一键出制备流程

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参数

18×16 mm 玻璃板一块就算一块胶;按下面的默认体积,一块胶需要分离胶 8 ml、浓缩胶 5 ml。

%

常用 8%(大分子)、10%(通用)、12%、15%(小分子);浓度越高孔径越小。

%

实验室常用 30%(29:1 或 37.5:1)或 40% 丙烯酰胺/Bis 母液,选不到就填自己那瓶的浓度。

%

浓缩胶几乎固定用 4%(有时 5% 或 6%),靠 pH 6.8 与 pH 8.8 之间的移动界面把样品压成一条带。

ml

按制胶架和玻璃板规格调整:0.75 mm 的 Mini 胶一般一块 8~10 ml 分离胶。

ml

配方

制备流程

常见浓度怎么选

分离胶 适合分离 典型用途
8%大于 100 kDa大分子蛋白
10%40 ~ 200 kDa通用,多数抗体靶点
12%15 ~ 100 kDa日常最常用的浓度
15%10 ~ 70 kDa中小分子蛋白
15% 铺底 + 8% 上层10 ~ 200 kDa双层胶,一次跑完宽范围
20%3 ~ 50 kDa多肽与很小的蛋白
Tris-Tricine 胶小于 10 kDa多肽、蛋白片段(需另配 Tricine 缓冲系统)
4% 浓缩胶—几乎所有常规配方都用它

上表只是经验对照,不是本工具算出来的结果:分离胶百分比决定适合分离的蛋白区间,浓度越高孔径越小。

这是什么工具

SDS-PAGE-Calc 把制胶时那套「8 毫升水加多少母液、Tris 取几毫升」的口算一次做完:填胶块数与分离胶、浓缩胶的目标百分比,就给出两侧各自的 ddH₂O、丙烯酰胺母液、Tris、SDS、APS、TEMED 取量,并附六步制备流程,可复制也可打印贴在实验台边。它对标 cytographica.com/lab/acryl2.html,算式与原站逐项一致(分离胶每块 8 ml、浓缩胶每块 5 ml,Tris 占 1/4 体积,SDS 与 APS 各占 1/100,TEMED 占 1/1000),在此之上多了实时计算、母液浓度和每块体积自定义、以及文本导出。

所有计算都在你自己的浏览器里完成:没有后端,不上传任何参数;当前输入存在浏览器本地,刷新还在。原站是 2007 年的表单加弹窗打印,这里换成静态页面加打印样式表,手机上在实验台边也能直接用。

功能

怎么用

  1. 填胶块数:一次灌几块玻璃板就填几。
  2. 填分离胶百分比,选或填丙烯酰胺母液浓度;浓缩胶一般保持 4% 即可。
  3. 对照配方表量取:毫升用量筒或大枪,微升用 10 µl 枪;APS 与 TEMED 最后加。
  4. 点「复制配方文本」贴进实验记录,或点「打印 / 存 PDF」把流程打在胶盒盖上。

常见问题

分离胶和浓缩胶为什么要用两种 pH?
浓缩胶是 0.125 M Tris pH 6.8,分离胶是 0.375 M Tris pH 8.8。pH 6.8 下甘氨酸几乎不解电,Cl⁻ 跑在前面,蛋白-SDS 复合物夹在两者之间,移动界面把样品压成只有几微米厚的窄带;界面一进 pH 8.8 的分离胶,甘氨酸完全解电、跑得比蛋白快,此时才按分子筛效应分开。这就是「浓缩胶 / stacking」名字的来由。
APS 和 TEMED 为什么要最后加?
两者一起产生自由基启动丙烯酰胺聚合,一混合胶液就开始计时凝固,常温下十几分钟就明显变稠。所以先把水、母液、Tris、SDS 混匀脱气,把胶架和电泳缓冲液准备好,最后加 TEMED 和 APS,立刻灌胶插梳子。10% APS 在 4 °C 只能用一两周,失效是「胶不凝」最常见的原因。
30% 和 40% 母液有什么区别?要改算法吗?
只是稀释起点不同:配 10 ml 10% 胶,取 30% 母液 3.33 ml,取 40% 母液只要 2.50 ml,其余用水补足,终浓度完全一样。30%(29:1 或 37.5:1)常温下更稳定、黏度低好量取;40% 加得少,给水和缓冲液留的空间多。Bis 交联比(29:1、37.5:1、19:1)决定孔径和脆性,不在本工具的计算范围内。
算出来的体积够灌几块板?
默认分离胶 8 ml 加浓缩胶 5 ml 对应一块 18×16 mm 玻璃板、0.75~1.0 mm 厚度,所以 Mini-PROTEAN Tetra 一次灌四块就把胶块数填 4。若液面低于梳子齿、灌不满,就把「每块分离胶体积」调到 10 ml;1.5 mm 厚板或大胶槽按同样思路放大。宁可多算一两毫升剩下,别在灌到一半时没液可加。
会上传我的实验参数吗?
不会。页面纯静态、没有后端接口,全部算术在浏览器本地完成;参数只写进浏览器本地存储,清空或换浏览器就消失。未发表的配方也可以放心算。

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