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SDS-PAGE-Calc 凝膠配方計算

分離膠 + 濃縮膠 · 按塊數與百分比 · 一鍵出製備流程

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參數

18×16 mm 玻璃板一塊就算一塊膠;按下面的默認體積,一塊膠需要分離膠 8 ml、濃縮膠 5 ml。

%

常用 8%(大分子)、10%(通用)、12%、15%(小分子);濃度越高孔徑越小。

%

實驗室常用 30%(29:1 或 37.5:1)或 40% 丙烯醯胺/Bis 母液,選不到就填自己那瓶的濃度。

%

濃縮膠幾乎固定用 4%(有時 5% 或 6%),靠 pH 6.8 與 pH 8.8 之間的移動界面把樣品壓成一條帶。

ml

按制膠架和玻璃板規格調整:0.75 mm 的 Mini 膠一般一塊 8~10 ml 分離膠。

ml

配方

製備流程

常見濃度怎麼選

分離膠 適合分離 典型用途
8%大於 100 kDa大分子蛋白
10%40 ~ 200 kDa通用,多數抗體靶點
12%15 ~ 100 kDa日常最常用的濃度
15%10 ~ 70 kDa中小分子蛋白
15% 鋪底 + 8% 上層10 ~ 200 kDa雙層膠,一次跑完寬範圍
20%3 ~ 50 kDa多肽與很小的蛋白
Tris-Tricine 膠小於 10 kDa多肽、蛋白片段(需另配 Tricine 緩衝系統)
4% 濃縮膠—幾乎所有常規配方都用它

上表只是經驗對照,不是本工具算出來的結果:分離膠百分比決定適合分離的蛋白區間,濃度越高孔徑越小。

這是什麼工具

SDS-PAGE-Calc 把製膠時那套「8 毫升水加多少母液、Tris 取幾毫升」的口算一次做完:填膠塊數與分離膠、濃縮膠的目標百分比,就給出兩側各自的 ddH₂O、丙烯醯胺母液、Tris、SDS、APS、TEMED 取量,並附六步製備流程,可複製也可列印貼在實驗台邊。它對標 cytographica.com/lab/acryl2.html,算式與原站逐項一致(分離膠每塊 8 ml、濃縮膠每塊 5 ml,Tris 佔 1/4 體積,SDS 與 APS 各佔 1/100,TEMED 佔 1/1000),在此之上多了實時計算、母液濃度和每塊體積自定義、以及文本導出。

所有計算都在你自己的瀏覽器裏完成:沒有後端,不上傳任何參數;當前輸入存在瀏覽器本地,刷新還在。原站是 2007 年的表單加彈窗列印,這裏換成靜態頁面加列印樣式表,手機上在實驗台邊也能直接用。

功能

怎麼用

  1. 填膠塊數:一次灌幾塊玻璃板就填幾。
  2. 填分離膠百分比,選或填丙烯醯胺母液濃度;濃縮膠一般保持 4% 即可。
  3. 對照配方表量取:毫升用量筒或大槍,微升用 10 µl 槍;APS 與 TEMED 最後加。
  4. 點「複製配方文本」貼進實驗記錄,或點「列印 / 存 PDF」把流程打在膠盒蓋上。

常見問題

分離膠和濃縮膠為什麼要用兩種 pH?
濃縮膠是 0.125 M Tris pH 6.8,分離膠是 0.375 M Tris pH 8.8。pH 6.8 下甘氨酸幾乎不解電,Cl⁻ 跑在前面,蛋白-SDS 複合物夾在兩者之間,移動界面把樣品壓成只有幾微米厚的窄帶;界面一進 pH 8.8 的分離膠,甘氨酸完全解電、跑得比蛋白快,此時才按分子篩效應分開。這就是「濃縮膠 / stacking」名字的來由。
APS 和 TEMED 為什麼要最後加?
兩者一起產生自由基啟動丙烯醯胺聚合,一混合膠液就開始計時凝固,常溫下十幾分鐘就明顯變稠。所以先把水、母液、Tris、SDS 混勻脫氣,把膠架和電泳緩衝液準備好,最後加 TEMED 和 APS,立刻灌膠插梳子。10% APS 在 4 °C 只能用一兩週,失效是「膠不凝」最常見的原因。
30% 和 40% 母液有什麼區別?要改算法嗎?
只是稀釋起點不同:配 10 ml 10% 膠,取 30% 母液 3.33 ml,取 40% 母液只要 2.50 ml,其餘用水補足,終濃度完全一樣。30%(29:1 或 37.5:1)常溫下更穩定、黏度低好量取;40% 加得少,給水和緩衝液留的空間多。Bis 交聯比(29:1、37.5:1、19:1)決定孔徑和脆性,不在本工具的計算範圍內。
算出來的體積夠灌幾塊板?
默認分離膠 8 ml 加濃縮膠 5 ml 對應一塊 18×16 mm 玻璃板、0.75~1.0 mm 厚度,所以 Mini-PROTEAN Tetra 一次灌四塊就把膠塊數填 4。若液面低於梳子齒、灌不滿,就把「每塊分離膠體積」調到 10 ml;1.5 mm 厚板或大膠槽按同樣思路放大。寧可多算一兩毫升剩下,別在灌到一半時沒液可加。
會上傳我的實驗參數嗎?
不會。頁面純靜態、沒有後端接口,全部算術在瀏覽器本地完成;參數只寫進瀏覽器本地存儲,清空或換瀏覽器就消失。未發表的配方也可以放心算。

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